前言

大戟属是大戟科的最大属，其特点是产生乳状刺激性乳胶，并且以产生大量结构多样性的次级代谢产物而闻名。大戟属植物已被用于治疗皮肤病、淋病、偏头痛、肠道寄生虫和疣。已从该属中分离出来各种天然产物，包括倍半萜，二萜，三萜，黄酮和类固醇。但是，据报道，二萜类化合物具有许多生物学活性，包括抗肿瘤、逆转多药耐药、抗炎和抗HIV等活性。作者从铁海棠（Euphorbiamilii）中分到了三种新的ent-rosane型二萜，其特征是一种新的7/5/6骈合三环系统(Ehomilonea，1)、5/7/6骈合三环系统(Ehomiloneb，2)和10，19-氧桥(Ehumianola，3)。

作者基于HRESIMS得到化合物EuphomiloneA(1)的分子式为C20H32O3，表明有5不饱和度。IR谱显示在νmax和cm-1有强吸收表明存在羟基和羰基。1HNMR数据表示存在四个甲基（δH1.01、1.15、1.15和0.78），乙烯基系统（δH5.83，dd，10.7，17.5Hz;4.85，d，10.7Hz;4.93，d，17.5Hz）和两个次甲基（δH3.76，d，6.9Hz;4.04，d，10.4Hz）。13CNMR数据和HSQC频谱显示了20个碳信号，包括4次甲基（δC23.6、25.7、24.2、14.5），乙烯基（δC.0，.0），酮羰基（δC.9），氧化次甲基（δC75.6）和氧化叔碳（δC84.1）。前述数据表明可能存在pimarane型或rosane型二萜。这两个骨架的不同之处在于CH3-20。CH3-20连在C-9时为rosane型二萜，连在C-10时为pimarane型二萜。rosane型二萜类化合物的HMBC谱表现出H3-20与C-8和C-11的相关性，在Pimarane型二萜类化合物中无法观察到这一点。H3-20（δH0.78）与C-8（δC38.4），C-9（δC49.0），C-10（δC84.1）和C-11（δC26.4）的HMBC相关表示CH3-20位于C-9，证实其为rosane型二萜。H3-19/18（δH1.15）与C-3（δC75.6），C-4（δC50.6）和δC.9处的HMBC相关表明羰基碳位于C-5处。基于H-6与C-1，C-5，C-8和C-10的HMBC相关，进一步表明C5-C10键断裂，并形成C6-C10键。因此，化合物1的平面结构被确定为前所未有的7/5/6三环rosane型二萜。

NOESY光谱中的H3-19/H3-20/H-6交叉峰表示其共面。因为在1HNMR光谱（打谱试剂：CDCl3）没有3-OH和10-OH的信号，所以3-OH和10-OH的方向无法从NOESY谱中识别出来。

幸运的是，从正己烷/EtOAc（2∶1）获得化合物1的晶体。因此，化合物1的绝对构型通过CuKα辐射的单晶X射线实验被证实为3R，6R，8S，9S，10R，13S（图1）[图3;Flack参数：-0.05（14）]。

作者基于HRESIMS得到化合物EuphomiloneB(2)的分子式为C20H32O3，表明有5不饱和度。化合物2的核磁共振数据与1相似，其13CNMR表明有四个甲基，七个亚甲基，四个次甲基，三个季碳，氧化叔碳和羰基。同样，化合物2具有特征乙烯基（δC.8，.3），羰基酮（δC.9），含氧次甲基（δC78.5）和氧化叔碳（δC85.1）。上述数据表明化合物2也是rosane型二萜。基于H3-19（δH0.94）与碳δC78.5、85.1和50.4之间的HMBC相关，C-5位被定义氧化叔碳。H-1（δH3.65，dd，11.2，4.7Hz）与碳δC78.5、85.1、30.5、.9和33.4的HMBC相关，H3-20（δH1.05，s）至C-8（δC34.5），C-9（δC49.7），C-10（δC.9）和C-11（δC29.6）的HMBC相关揭示C-10是酮羰基。H-1/H-2和H-2/H-3（图4）的COSY相关表明CH-CH2-CH-O片段。以上所有数据均表明C5-C10键的裂解和C1-C5键的形成。因此，如图1所示，建立了化合物2的平面结构。

化合物2的相对构型通过NOESY确定和NOE差异实验确定。在NOESY谱中，H-1/H3-19/H3-20/H-14α/H-16交叉峰表示H-1/H3-19/H3-20为共面的，并为其指配了α方向。在CDCl3溶剂的1HNMR中无法观察到羟基质子信号，而在丙酮-d6中能看到。如图S17中的支持信息，在δH处观察到两个羟基的信号3.66（d，J＝5.6Hz，3-OH）和δH2.95（s，5-OH）。在NOE差异频谱中（图S17，支持信息），H-3的辐射引起3-OH和5-OH的增强，提示H-3和5-OH是共面的。与1相比，2的相对构型如图1所示。

从生合成上讲，化合物2中的20-CH3和17-CH3应该与1中的方向相同。因此，化合物2的绝对构型被建立为1R，3R，5R，8S，9S，13S，这是通过实验和计算的电子圆二色谱(ECD)的比较来支持的（图5）。

作者基于HRESIMS得到化合物3的分子式为C20H32O3，表明有5不饱和度。化合物3的NMR数据显示了rosane型二萜的特征信号,但存在CH2O基团（δC74.9），并且没有一个甲基，这表明化合物3也是一个修饰性的rosane型二萜。根据HMBC和COSY相关性的分析揭示了化合物3的平面结构。

化合物3的相对构型由NOESY光谱并与化合物1和2数据进行比较。在NOESY谱中，H-19/H3-20交叉峰表明H-19为α-取向。根据化合物1和2中C-9和C-13的构型，将3中的17-CH3和20-CH3分配为β-和α-方向。从己烷/EtOAc（2：1）中获得化合物3的晶体并用CuKα辐射进行X射线衍射实验[图7;Flack参数：-0.08（12）]。因此，得到化合物3的绝对构型为3S，4R，5S，8S，9S，10R，13S，化合物3命名为euphomianolA。

生合成推测

作者推测了化合物1-3可能的生物合成途径。ent-Rosane，主要的rosane型二萜，是被作为这三种化合物的生物合成前体。对ent-Rosane的C-3，C-5，C-10和C-19进行氧化会生成中间体i，然后中间体i脱水形成化合物3的环醚。对ent-Rosane的C-3，C-5和C-10氧化会产生中间体ii，可以通过进一步氧化裂解转化为iii。中间体iii可以进一步在碱性条件下通过6,10-亲核加成转化为化合物1和1,5-亲核加成转化成化合物2。

活性测试

作者测定了化合物1-3对RANKL诱导的RAW.7细胞系中破骨细胞生成的抑制作用。只有化合物1表现出抑制作用，IC50为12.6μM。

提取分离

用80％丙酮水（3×20L）在室温下浸渍2天。减压蒸发溶剂至产生粗提取物（g），将其悬浮在水中并依次用EtOAc（3×3L）萃取。然后，将可溶于EtOAc的萃取液（g）在硅胶柱上进行色谱分离，并用二氯甲烷：甲醇梯度洗脱，得到三个片段（Fr.1，Fr.2，Fr3）。将Fr.2（50g）置于硅胶上凝胶柱，使用CH2Cl2-EtOAc的：1逐步梯度洗脱，得到六种馏分（FA1，FA2，FA3，FA4）。FA1在硅胶CC上色谱分离，以环己烷-EtOAc（20：1）为洗脱剂得到七个馏分FA1B1-FA1B7。用硅胶CC（环己烷-丙酮，：1至2：1）纯化FA1B4S4用60％乙腈-H2O进行半制备HPLC，得到化合物2（6mg）。FA1B6已通过用65％乙腈-H2O进行半制备性HPLC分析，得到化合物3（40mg）。FA2原为在硅胶上进行色谱分离，用环己烷-乙酸乙酯（20：1）作为洗脱剂，得FA2B1-FA2B5。通过RP-C18硅胶用70％MeOH-H2O纯化FA2B1，得到化合物1（12mg）。

总结

1.大戟属植物一般用95%乙醇水冷提或者丙酮（文献中也有用70%丙酮）加热回流提取。文献中用丙酮加热回流提取南欧大戟，之后用石油醚萃取。作者做的石油醚层，先用大孔树脂（甲醇：水）进行了粗分。这也提醒我对于极性较小的馏分可以尝试大孔树脂的分离。

2.对于难以结晶的二萜，可以尝试用正己烷/EtOAc（2∶1）进行重结晶。

本文于年11月22日在线发表于ACS旗下期刊OrganicLetters:

刘少南为第一作者，顾琼副教授和Kuo-HsiungLee教授为共同通讯作者，中山大学和北卡罗来纳大学为共同通讯单位

文献